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ATP 酶染色

日期:2025-11-07 返回


以下是關于 ATP 酶染色的相關介紹:


基本原理

ATP 酶是一種水解酶,可催化 ATP 分解產生能量。在 ATP 酶染色中,常用的是鈣鈷法,其原理是 ATP 酶水解 ATP 為 ADP 和磷酸,磷酸與鈣離子在酶活性部位結合形成無色的磷酸鈣沉淀,磷酸鈣經氯化鈷處理形成磷酸鈷,再經硫化銨處理便形成棕黑色的硫化鈷沉淀在酶活性部位,從而通過觀察沉淀的分布和顏色深淺來顯示 ATP 酶的分布和活性情況。


操作步驟

取材與冷凍切片:麻醉動物后,在偏離麻醉劑注射的位置選取肌肉取材部位,劃開皮膚及目標肌肉,切下大小約為 10mm×5mm×5mm 的肌肉塊,將其置于用生理鹽水濕潤過的紗布上。把裝有異戊烷的離心管置于液氮中預冷至底部結霜,然后將肌肉塊浸入預冷好的異戊烷中,勻速順時針旋轉 40-60 次,再迅速將其置于封口袋中并放入液氮中保存。最后使用冷凍切片機對冷凍的肌肉塊進行切片。

試劑配制:配制預孵育液、增強洗液、孵育液、氯化鈷溶液及硫化銨溶液等試劑備用。其中預孵育液一般由乙酸鈉、巴比妥鈉、雙蒸水等原料混合而成。

染色處理:室溫下將切片置于預孵育液中處理 3-5min,處理完后取出切片并置入增強洗液中洗 15-30s,隨后將切片浸入孵育液中 37℃處理 25-30min,再將切片浸入氯化鈷溶液中處理 3-5min,取出后先用自來水沖洗數次,再用雙蒸水洗 4 次,隨后將切片浸入硫化銨溶液中處理 20-30s,最后流水沖洗,然后脫水封片。




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